ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭЛЕКТРОПУНКТУРЫ ПРИ ЗАЖИВЛЕНИИ ПОЛНОСЛОЙНОГО ДЕФЕКТА КОЖИ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

 

 

Петрова Маргарита Борисовна

Ученая степень – доктор биологических наук

Ученое звание – профессор

Должность –  зав. кафедрой биологии Тверской государственной

медицинской академии

Шестакова Валерия   Геннадьевна

Ученая степень – кандидат биологических наук

Ученое звание и должность – доцент

Место работы – кафедра биологии ТГМА

Харитонова Елена Анатольевна

Ученая степень – кандидат биологических наук

Ученое звание и должность – доцент

Место работы – кафедра биологии ТГМА

Павлова Наталья Владимировна

Ученая степень – кандидат медицинских наук

Ученое звание и должность – доцент

Место работы – кафедра биологии ТГМА

Курбатова Лариса Артовазовна

Ученая степень – кандидат химических наук

Должность – ст. преподаватель

Место работы – кафедра биологии ТГМА

 

 

 

 

 

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭЛЕКТРОПУНКТУРЫ  ПРИ ЗАЖИВЛЕНИИ ПОЛНОСЛОЙНОГО ДЕФЕКТА КОЖИ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

 

Проблема лечения кожных ран остается актуальной, так как на данном этапе развития медицины перед врачом всегда стоит вопрос о выборе метода воздействия на область дефекта. Одним из способов оптимизации заживления может являться рефлексотерапия (РТ), высокая эффективность которой подтверждена многочисленными исследованиями [1, с.167; 5, с. 333.]. Среди других методов РТ электропунктура (ЭП) отличается своеобразием в методике и технике проведения, которое базируется на учении о главных звеньях воздействия РТ на организм. К ним относятся: способ (иглоукалывание, прижигание, ЭП, массаж), место (точки акупунктуры), метод (возбуждающий, тормозной), момент (время наиболее эффективного влияния на функции органов и систем). [2, с.4; 3, с.15; 6, с.126].    

Наши исследования проведены на 52 белых крысах самцах, средней массой 145г. Первая серия – контрольная, животным наносились стандартные полнослойные хирургические дефекты на дорсальной поверхности тела, площадью 225 мм2. Крысам второй опытной серии после нанесения аналогичных ран воздействовали на точку акупунктуры (ТА) GI-4 с помощью прибора для электропунктуры ЭП-4.

         Выбранная нами ТА GI-4 является точкой общего действия, симпатотоническая, которая входит практически во все рефлексотерапевтические  рецепты [4, с.156]. Эта ТА по данным литературы, обладает аналгетическим и противовоспалительным действием, влияет на иммунную систему, количество и функциональную активность фагоцитов [1, с.167]. Однако в этом вопросе в литературе нет однозначных мнений. Так, B. Sakic et al. [9, с.115] указывают на то, что ЭП может оказывать не только стимулирующее, но и угнетающее действие на иммунокомпетентные клетки. По мнению A.М. Василенко и соавт. [1, с.167] именно точка GI-4,  (а также GI-11; Е-36; VG-14; IG-26; I-20 и RP-5) могут рассматриваться как наиболее эффективные для регуляции количества лейкоцитов и фагоцитов в крови и тем самым активно влиять на течение репаративных процессов. Точка GI-4 - четвертая точка меридиана толстой кишки, является одной из важнейших точек акупунктуры [3, с.112], расположена между I и II пястными костями, ближе к середине II пястной кости в ямке.

         Ультраструктурные изменения в тканях при репаративном процессе изучались путем взятия биопсий краев раны с прилежащими к области дефекта участками интактной кожи через 5 и 10 дней после операции [7, с.46].

         Через 5 дней после операции популяция фибробластов контрольных животных представлена, в основном, незрелыми формами. Это не крупные, веретеновидные клетки, с небольшим объемом цитоплазмы, в центре которых располагается округлое или овальное ядро. Оно окружено гладкой двухконтурной кариолеммой, хорошо выражено перинуклеарное пространство, кариолимфа богата внутриядерными рибосомами, хроматин распределен относительно равномерно. Характерной особенностью фибробластов этой формации является незначительное развитие органелл в цитоплазме. Гранулярная цитоплазматическая сеть обычно занимает небольшую площадь и часто ориентирована вдоль оси клетки. Узкие канальца заполнены содержимым средней электронной плотности. Основная масса рибосом фиксирована на мембранах ретикулума, а свободная их часть располагается в узких полосках межканальцевой цитоплазмы. Некоторые из них образуют полисомные комплексы в виде розеток. Пластинчатый комплекс представлен системой микроцистерн и микропузырьков. Митохондрии распределены в цитоплазме равномерно, имеют овальную форму и средние размеры.

         Кроме незрелых элементов в популяции фибробластов встречаются отдельные клетки с более выраженной синтетической функцией, о чем в первую очередь свидетельствует присутствие в цитоплазме хорошо развитого гранулярного ретикулума. Сеть представлена узкими цистернами канальцевого типа, заполненными содержимым средней электронной плотности. Мембраны содержат один ряд фиксированных рибосом, а окружающая их цитоплазма заполнена массой свободно лежащих  рибосом.

         Пластинчатый комплекс достаточно развитый,  с цистернами и везикулами, заполненными гомогенным веществом. Ядра активно функционирующих фибробластов остаются крупными, окружены двойной кариолеммой, с четко выраженным перинуклеарным пространством. Содержимое ядра дифференцированно на эу- и гетерохроматин, хорошо заметны типично расположенные ядрышки (одно или два).  Митохондрии встречаются в цитоплазме довольно часто, имеют овальную форму, достаточно крупные, со значительным числом четко контурируемых крист.

         У животных, находившихся в условиях воздействия на точку акупунктуры  GI-4, через 5 дней после операции, нами были отмечены некоторые отличия в ультраструктурной характеристике фибробластов  грануляционной ткани.

         Незрелые формы фибробластов находились в состоянии функциональной активности, о чем свидетельствуют округлые крупные ядра богатые хроматином,  одно или два эксцентрично расположенных ядрышка.  Гранулярный ретикулум развит достаточно хорошо, несмотря на небольшой объем цитоплазмы фибробластов. Цитоплазматическая сеть предоставлена системой расширенных канальцев и цистерн, заполненных мелкозернистым содержимым. На мембранах канальцев фиксирована масса рибосом, а в окружающей цитоплазме видны множественные полисомные комплексы в виде розеток.

         Наряду с описанными незрелыми формами фибробластов в грануляционной ткани животных данной серии, встречаются и более зрелые клетки с ярко выраженной коллагенсинтезирующей функцией и ультраструктурными признаками ускоренной эвакуации продуктов синтеза в межклеточное пространство.

         Ядра зрелых фибробластов характеризуются крупными размерами, гипертрофированными ядрышками, расположенными вблизи кариолеммы, большим количеством хроматина. Гетерохроматин преимущественно располагается под кариолеммой. Перинуклеарное пространство расширено и хорошо выражено на всем протяжении. Каналы и многочисленные цистерны цитоплазматического ретикулума заполнены мелкозернистым содержимым. Множество рибосом  находится как в фиксированном, так и  свободном состоянии, в виде розетковидных комплексов между складками ретикулума.       

         В цитоплазме фибробластов этой популяции мы встречали крупные митохондрии с множественными протяженными, параллельно расположенными кристами и электронноплотным матриксом. В экстрацеллюлярном пространстве располагаются множественные коллагеновые волокна с характерной поперечной исчерченностью.

         Через 10 дней после операции значительную часть клеточной популяции фибробластов представляют незрелые формы, находящиеся в состоянии нормальной функции и зрелые фибробласты, которые характеризуются значительным развитием гранулярного ретикулума. Эти клетки обладают крупным, овальным ядром и значительным объемом цитоплазмы. Обычно канальца ретикулума располагаются по всей цитоплазме. Его мембранные профили содержат фиксированные рибосомы, а окружающая  их цитоплазма - множество свободных рибосом и полисомных комплексов. 

         В этот срок в популяции фибробластов у контрольных животных обнаруживаются клетки, которые по особенностям ультраструктуры можно отнести к фиброцитам. Это клетки со сниженной синтетической функцией.  Канальца цитоплазматического ретикулума редуцированы. Они фрагментируются, ориентируются вдоль длинной оси клетки, рибосомы с них слущиваются и свободно лежат в цитоплазме. Пластинчатый комплекс      представлен лишь отдельными вакуолями. Митохондрии набухают, приобретают неправильную форму. Нарушается целостность наружной мембраны митохондрий, а матрикс  имеет различную электронную плотность. Часто в непосредственной близости с дегенерирующими митохондриями располагаются крупные лизосомы с неоднородным содержимым. Кроме того, в составе цитоплазмы часто встречаются фрагменты дегенерирующих органелл в виде ламеллярных телец.

         В межклеточном пространстве пучки коллагеновых волокон  с характерной поперечной исчерченностью  располагаются вдоль наружной клеточной мембраны.

         У животных опытной серии, получавших электропунктуру точки GI-4, характер ультраструктурных изменений подавляющего большинства клеток свидетельствует об их значительной метаболической активности.

         Ядра  фибробластов крупные, овальной или округлой формы, с четким разделением на эу- и гетерохроматин, хорошо выраженным перинуклеарным пространством и порами в кариолемме. Цитоплазматический ретикулум развит хорошо и состоит из сети расширенных цистерн, заполненных мелкозернистым содержимым. Мембранные профили ретикулума плотно упакованы рибосомами, а в цитоплазме располагается огромное количество розетковидных полисомных комплексов и отдельных рибосом. В тесном контакте с мембранами цитоплазматической сети располагается множество крупных митохондрий с протяженными кристами и просветленным матриксом. Кристы приобретают правильную ориентацию и между ними можно заметить  полисомные комплексы.

         Пластинчатый комплекс располагается не только в околоядерной зоне,   но  и  в   периферической  части  цитоплазмы. В его состав входят уплощенные цистерны, крупные вакуоли и множество мелких везикул распределенных по всей цитоплазме. Пузырьки, которые являются преобладающим компонентом пластинчатого комплекса, содержат мелкозернистое вещество средней электронной плотности.

        Необходимо отметить также, что среди клеток   данной популяции  обнаруживаются фиброциты. Наиболее выраженным изменениям в них подвергается цитоплазматический ретикулум, который состоит из отдельных немногочисленных каналов и цистерн, ориентированных вдоль  оси клетки. Ядра этих клеток имеют причудливую вытянутую форму и характеризуются маргинальной локализацией хроматина. Пластинчатый комплекс также слабо развит. Уменьшается количество и размеры митохондрий, кристы в них немногочисленны и правильно ориентированы, матрикс средней электронной плотности. В цитоплазме  встречаются отдельные лизосомы и слоистые структуры.

         В межклеточном веществе грануляционной ткани у животных данной серии располагаются широкие поля зрелых коллагеновых волокон с характерной поперечной исчерченностью. Волокна агрегируются в пучки, которые имеют упорядоченную направленность.

         Результаты анализа тонкой структуры фибробластов грануляционной ткани в условиях воздействия электрическим током на ТА при заживлении полнослойной раны свидетельствуют о значительной перестройке всех внутриклеточных органелл и особенно ультраструктур, осуществляющих синтез, накопление и выведение коллагена. Данные электронномикроскопических исследований подтверждаются показателями планиметрии. Сроки заживления ран сократились в среднем на 2 дня по сравнению с контролем.

ЛИТЕРАТУРА

1. Василенко А.М. Основные принципы адаптогенного действия рефлексотерапии//  Итоги науки и техники ВИНИТИ (сер.физиол.).-1985.- С.167-203.

2. Вержбицкая Н.И. Механизм воздействия на организм через точки акупунктуры//  В сб.: “Медико-технические вопросы рефлексотерапии, физиологии и контроля окружающей среды”.- 1992. -  С.4-7.

3. Табеева Д.М.   Руководство по иглорефлексотерапии//  М., 1980.- С. 15.

4. Шестакова В.Г., Харитонова Е.А., Павлова Н.В.// Морфо-биохимическое исследование показателей фосфоинозитидного обмена крови при заживлении ран кожи в условиях электропунктуры. Морфология. 2008 - № 2. – С. 156.

5. Петрова М.Б., Шестакова В.Г., Харитонова Е.А., Павлова Н.В., Курбатова Л.А., Черняев А.Н. // Влияние электропунктуры и острой гипоксической гипоксии на состояние органов животных. Материалы XIV Международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации». 09-10 апреля 2009 М. Российский универ. Дружбы народов. – 2009.- С. 333-335

6. Петрова М.Б., Шестакова В.Г., Харитонова Е.А., Павлова Н.В., Курбатова Л.А.// Заживление ран кожи в условиях применения микротоков, как стимуляторов точек акупунктуры. Сб. научных трудов, посвящ. 70-летию зав.каф.детских болезней А.Ф.Виноградову. Тверь:  РИЦ ТГМА, 2009.- С.126-131.       

7. Петрова М.Б., Хомулло Г.В.// Изучение регенерации тканей на биологических  моделях и в клинике. Верхневолжский медицинский журнал. Т.9, вып. 4.- 2011.- С. 45-49.

8. Павлова Н.В., Харитонова Е.А., Шестакова В.Г., Курбатова Л.А.// Локальная термометрия как дополнительный метод оценки регенерации ран кожи  челюстно-лицевой области. Морфология. 2008 - №5.- С. 86.

9. Sakic B., Kojik I., Jancovic B.D., Skokliev A. Electroacupuncture modifies humorial immun response in the rat// Acupuncture a. Electro-Ther.Res.Int.J.- 1989.- V. 14.- P. 115-120.